該實驗在愛達荷大學動物、獸醫和食品科學系的生殖生理學實驗室進行。實驗期間實驗室的溫度約為22°C。

　　使用容量為30L的液氮儲罐(Union Carbide Linde，LR-30型，美國)。在實驗期間，該罐中沒有儲存精液。罐頸直徑為7cm，頸管長度為12cm，與牧民授精員和專業人工智能技術人員目前在奶牛場使用的罐相似。在實驗開始時，向罐中填充18L液氮(相當于22cm)。使用配備有能夠進行6秒響應時間的空氣(氣體)探頭的手持式熱電偶溫度計(TM602;Palmer Wahl Instrumentation Group，Asheville，NC，USA)在三個位置采集溫度測量值：1)頸部部下方2 cm(霜線上方)，2)頸部部以下7 cm(霜線上和建議的精液吸管移除位置下方)，3)液氮液位上方2 cm(圖1)。

　　通過用不銹鋼勺手動去除液氮，罐中的液氮液位從22厘米逐漸降低到7厘米(液氮的體積分別從18升逐漸降低到6升)。如前所述，在每個位置測量溫度四次，罐中有22、20、19、18、16、12、10和7cm的液氮。每次溫度測量之間的間隔時間至少為2小時，以便有足夠的沖洗期，避免潛在的遺留影響。第一輪實驗完成后，再次向同一罐中注入液氮，并在相同的液氮水平和重復次數下重復第二次實驗。

　　使用SAS中的通用線性混合模型程序GLIMMIX分析了液氮液位、位置和雙向相互作用對儲罐溫度的影響數據[8]。該模型包括位置、體積和按位置劃分的體積的影響。計算了所有儲罐位置的溫度變化和小二乘平均溫度的參數估計值。顯著性在P<0.05時較好。

精液儲罐中的溫度對于維持儲罐內儲存的精液的存活率至關重要。測量溫度的三個位置的溫度變化不一致。根據估計的方差，位置2(頸部部以下7厘米，霜線以下)表現出大的變異性(表1)。位置和位置體積對儲罐溫度有影響(P<0.01)。

　　與頸部部以下7cm(霜線以下)相比，頸部部以下2cm的平均水箱溫度更高(P<0.01)(6.4±0.1°C vs-38.3±0.4°C)(表1)。我們關于位置2溫度(霜線以下)的數據非常接近Kaproth報告的上限(-40°C)[4]。隨著氮水平的降低，溫度保持在0°C以上，在頸部部以下2厘米處(位置1)沒有變化。相比之下，在位置2，隨著液氮體積的減少，頸部部以下7厘米處的溫度升高(從-41.1±1°C升高到-36.7±1°C;P<0.05)(圖2)。這些結果與之前的報告[4]一致，即頸部區域溫度升高與儲罐液氮液位較低有關。盡管位置3(液氮水平以上2厘米)的平均溫度為-186.3±0.1(表1)，但隨著液氮體積的減少，溫度升高(從-187±0.3°C升高到-185±0.3°C;P<0.05)。